人胃癌细胞MGC803培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人胃癌细胞MGC803
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P
传代方法：第一次建议1:2的比例进行传代
传代情况：每2天更换培养液
备注：用无菌离心管收集培养基，以备对比实验。如对比培养效果不理想，建议直接使用ag尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

待细胞培养至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口，以确保细胞运输安全。收到细胞后，使用75%的酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净工作台内严格进行无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续操作。显微镜下观察细胞的生长情况，拍摄不同倍率的照片（推荐40x、100x和200x各一张）。前三天的照片将是售后服务的重要依据，若未提供照片，默认细胞状态良好。在传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自行配制的完全培养基，以便进行对比培养，换液后瓶盖应稍微松弛。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞未超过80%的汇合度，将培养瓶内的完全培养液收集到离心管中，保留5 ml的完全培养基置于37℃、5% CO2孵育。若细胞密度超过80%，即可进行传代，具体步骤如下：1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加025%的胰蛋白酶消化液约1-2 ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速用5 ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞直至完全脱落，吸出后将悬液转移至15 ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，添加1-2 ml完全培养基重悬细胞。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（两个T25培养瓶），补充新的完全培养基至5-8 ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2. 添加025%的胰蛋白酶消化液约1 ml至培养瓶中，显微镜下观察，待细胞收缩变圆后加入5 ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，将悬液转移至15 ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，加入1 mlag尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后装入冻存管中。
4. 冻存细胞可直接放入-80℃的冰箱，后续若需转入液氮罐中，应在-80℃冰箱中存放24小时后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，直至没有结晶形成后，用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2. 将冻存管中的细胞转移至含5 ml完全培养基的15 ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，加入5 ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养；
4. 隔天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

部分细胞在贴壁时可能不够牢固，运输过程中可能会发生细胞脱落，这是正常现象。如脱落数量较多，可将培养瓶内所有培养液收集至离心管中，1000 RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养（之后可进行对比实验）。沉淀部分可加入胰酶1-2 ml，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后，用5 ml完全培养基终止消化。再离心，弃去上清，补充1-2 ml完全培养基重悬，然后按1:2比例分瓶传代（两个T25培养瓶），补充新的完全培养基至5-8 ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题可重发的情况和判定标准：- 运输途中问题（如细胞丢失、瓶破损、培养液严重漏液）可重发；- 收到产品后48小时内提出的细胞污染问题，经核实后可重发；- 常温发货的细胞静置24小时后，冻存发货的细胞复苏后24小时内遇到活性问题（需提供真实清晰的细胞状态照片），可重发；- 若因非本库推荐的培养体系造成细胞状态不佳，或收到细胞2天内未告知状态，也不予重发。2）细胞出现问题不予重发的情况：- 客户造成污染，或不正确操作导致细胞状态不佳，不重发；- 细胞状态不良未提供收到前3天的照片、不重发，如有其它操作的情况也不重发。请遵循以上指南，确保使用ag尊龙凯时的细胞培养产品时获得最佳效果。如有疑问，请及时与我们的技术人员联系以获得更专业的支持。